Etude des mutations K385I/L du récepteur PDGFRα dans les tumeurs glioneuronales myxoïdes

Details

Supervisors

Jean-Baptiste Demoulin

Faculty

Faculté de pharmacie et des sciences biomédicales

Degree label

Master [120] en sciences biomédicales, à finalité approfondie

Abstract

Le récepteur PDGFRα est un récepteur à activité tyrosine kinase nécessaire à la prolifération, migration et survie cellulaire. Lorsque le PDGF se fixe sur le récepteur, celui-ci dimérise et s’autophosphoryle afin d’activer des voies de signalisation intracellulaires, dont la voie MAPK, la voie phosphatidylinositol-3 kinase, la voie phospholipase C-g et la voie STAT. Ce récepteur est impliqué dans différentes maladies et cancers lorsqu’il est muté ou surexprimé. Récemment, la mutation K385I/L du récepteur PDGFRα a été identifiée de manière récurrente chez des patients atteints de tumeurs glioneuronales myxoïdes (MGNT) dans le système nerveux central. Le but de ce projet consiste à caractériser la mutation K385I/L du récepteur PDGFRα. Pour cela, nous avons transfecté le gène du récepteur muté dans des lignées cellulaires de glioblastome. Après avoir confirmé l’expression du récepteur par western blot, nous avons analysé l’activité du récepteur PDGFRα muté. Les résultats suggèrent que le changement de la lysine en leucine/isoleucine en position 385 provoque une activation de certaines voies de signalisation de manière constitutive, c’est à dire indépendamment de la présence de ligand. Un test de transformation de fibroblastes a également permis de valider le potentiel oncogène de cette mutation. La mutation se situe dans le quatrième domaine immunoglobuline de la partie extracellulaire du récepteur qui est impliquée dans la dimérisation du récepteur. Des expériences de crosslinking et de co-immunoprécipitation ont permis de mettre en évidence une dimérisation constitutive du récepteur PDGFRα muté. En conclusion, ce mémoire a permis de caractériser la mutation PDGFRα K385I/L comme oncogène et d’élucider son mécanisme moléculaire impliquant une dimérisation constitutive du récepteur. The tyrosine kinase PDGFRα receptor is required for cell proliferation, migration and survival. When PDGF binds to the receptor, it dimerizes and autophosphorylates to activate intracellular signaling cascades including the MAP kinase pathway, the phosphatidylinositol-3 kinase pathway, the phospholipase C-γ pathway and the STAT pathway. The receptor is involved in various diseases and cancers when mutated or overexpressed. Recently, the K385I/L mutation of the PDGFRα receptor has been recurrently identified in patients with myxoid glioneuronal tumors (MGNT) in the central nervous system. The goal of this project was to characterize the K385I/L mutation of the PDGFRα receptor. We transfected the mutated receptor gene into glioblastoma cell lines. After confirming receptors expression by western blot, we analyzed the activity of the mutated PDGFRα. The results suggested that the change of lysine to leucine/isoleucine at position 385 causes a constitutive activation of several signaling pathways, i.e. independently of the presence of ligand. A fibroblast transformation assay confirmed the oncogenic potential of the K385I/L mutation. The mutation is located in the fourth immunoglobulin domain of the extracellular part of the receptor, which is involved in the dimerization of the receptor. Crosslinking and co-immunoprecipitation experiments showed that activation occurs through constitutive dimerization of the PDGFRα receptor. In conclusion, our results validated the PDGFRα K385I/L mutation as an oncogene through a constitutive receptor dimerization.