Visualisation en microscopie 3D des anomalies épithéliales dans la fibrose pulmonaire idiopathique

Details

Supervisors

Froidure, Antoine

Faculty

Faculté de pharmacie et des sciences biomédicales

Degree label

Master [120] en sciences biomédicales, à finalité spécialisée: toxicologie

Abstract

La fibrose pulmonaire idiopathique est une pathologie respiratoire chronique caractérisée par un remodelage des alvéoles et une accumulation du collagène au niveau du parenchyme pulmonaire distal. Ce dernier présente des structures épithéliales ectopiques sous la forme de kystes de pneumocytes de type 2 et de zones de bronchiolisation qui présentent une expression anormale de marqueurs bronchiques. Ces lésions sont mal décrites à ce jour et leur rôle dans la pathogenèse de la fibrose pulmonaire est inconnu. Des travaux préliminaires ont permis de visualiser de rares zones de continuité entre ces deux structures mais ces zones de transition sont difficiles à observer via des méthodes d’histologie classique. Afin de mieux décrire ces lésions et leur architecture, nous avons développé un protocole d’imagerie en trois dimensions (3D) utilisant la microscopie à feuillet de lumière. Pour obtenir des images tridimensionnelles, il est important que la lumière puisse passer au travers du tissu et c’est pourquoi un protocole appelé « transparisation » a été mis au point. Ce dernier est couplé à un immunomarquage pour révéler spécifiquement les anomalies épithéliales. Nous avons étudié et comparé les méthodes de transparisation d’organe précédemment décrites dans la littérature afin de déterminer le procédé optimal pour visualiser le tissu pulmonaire humain. Ce projet établit un protocole combinant le prétraitement FLASH, un immunomarquage et la transparisation par la méthode 3DISCO. Cette nouvelle technique a permis de décrire les anomalies épithéliales observée dans la fibrose pulmonaire idiopathique et de démontrer la présence de communications entre ces structures pathologiques.