Etude du gène yopO de yersinia enterocolitica et analyse de la translocation de yopO dans les macrophages

Details

Supervisors

Cornélis, Guy R.

Faculty

Faculté de médecine et médecine dentaire

Degree label

Mémoire de licence en technologie biomédicale

Abstract

Le genre Yersinia comporte trois espèces pathogènes. Il s’agit de Y.enterocolitica, Y. pseudotuberculosis et Y. pestis. la virulence de ces bactéries dépend à la fois du chromosome et d’un plasmide d’environ 70 Kb, appelés pYV pour « Plasmid involved in Yersinia virulence ». Il apparaît très conservé dans ces trois espèces. Le plasmide pYV des Yersinia code des protéines, appelées Yop, qui sont sécrétées dans le milieu environnant. Le système de sécrétion des protéines Yop constitue l’archétype du système de sécrétion de type III. Le plasmide pYV code également une protéine de membrane externe appelée YadA et une lipoprotéine appelée YlpA. La région comprise entre les coordonnées 1,5 et 4 du plasmide pYV de Y. enterocolitica contient un opéron codant 2 protéines de 84,5 et 30 kDa nommées YopO et YopP respectivement. Chez Y. pseudotuberculosis, une protéine d’environ 80 kDa est également sécrétée par le système de type III. La séquence du gène YpkA et la fonction de la protéine YpkA sont connus. En effet, YpkA est une sérine/thréonine présentant une similitude avec les sérines/thréonines kinases d’origine eucaryote. Son rôle serait donc de phosphoryler des protéines présentent dans le cytosol des cellules eucaryotes. Ce travail a été consacré à l’étude de la protéine YopO de Y. enterocolitica. Dans un premier temps, la séquence du gène YopO a été déterminée. L’analyse de cette séquence a révélé la présence de 2 grilles de lecture ouverte. La première, de 155 codons, présente une similitude avec une protéine de Y. pseudotuberculosis en amont de YpkA. Le deuxième code de la protéine YopO de 81 323 Da qui présente 96,7 % d’identité avec la protéine YpkA de Y. pseudotuberculosis. Cette similitude laisse à penser que YopO est également une sérine/thréonine kinase quoi serait internalisée dans les cellules eucaryotes. L’étude de la translocation de la protéine YopO au moyen d’une adénylate comme enzyme reporter a été réalisée à l’aide de deux protéines hybrides YopO-adénylate cyclase. Seule la protéine hybride contenant les 142 résidus amino-terminaux de YopO est internalisée dans les macrophages. Ce processus est dépendant d’autres protéines Yop : un mutant incapable de sécréter les protéines YopB et YopD n’internalise pas la protéine hybride dans les cellules eucaryotes.