Contribution à l’étude préclinique des extraits de Salvadora oleoides et Carpolobia lutea. 
Détermination de la toxicité in vitro et in vivo d’extraits bruts anti-inflammatoire et antiparasitaire.

Details

Supervisors

Pre Quetin-Leclercq Joëlle

Faculty

Faculté de pharmacie et des sciences biomédicales

Degree label

Master [120] en sciences biomédicales, à finalité spécialisée: toxicologie

Abstract

La nécessité commune de trouver de nouveaux traitements lie les maladies chroniques inflammatoires de l’intestin et les maladies tropicales négligées. L’extrait dichlorométhane de Carpolobia lutea G.Don (Polygalaceae) a démontré une activité antiparasitaire envers Trypanosoma brucei brucei, l’un des pathogènes responsables de la trypanosomiase africaine. L’extrait méthanolique de Salvadora oleoides Decne (Salvadoraceae) manifeste des propriétés anti-inflammatoires. Ces extraits ont préalablement été identifiés comme étant les plus actifs parmi une série d’extraits végétaux testés. L’objectif de ce travail est à présent d’étudier leur toxicité.
 Ce projet analyse dans un premier temps la viabilité cellulaire par méthode MTT de différents types de lignées cellulaires exposées aux extraits en culture in vitro.
Le second aspect de ce mémoire vise à déterminer la toxicité des extraits par méthode in vivo sur des souris NMRI femelles, au moyen d’administrations effectuées par gavage ou par injections intrapéritonéales. Trois types d’études ont été menées : un essai préliminaire de dose maximale tolérable, un test de toxicité aiguë réalisé par étapes en vue d’établir les doses létales médianes, et troisièmement, une expérience de toxicité subaiguë réalisée avec l’extrait S. oleoides durant laquelle des doses fixes ont été quotidiennement administrées durant quatorze jours.
 L’extrait S. oleoides n’a pas présenté de cytotoxicité aux doses maximales testées de 100 µg/mL. Pour la toxicité in vivo, la DL50 est évaluée à plus de 2500 mg/kg. Au terme de l’étude de toxicité subaiguë, l’extrait administré par gavage à une concentration de 1000 mg/kg/j n’a provoqué aucune mortalité ou état moribond, seul l’examen histopathologique a révélé une fibrose splénique aux mécanismes encore méconnus chez les souris exposées. L’extrait C. lutea présente une cytotoxicité non spécifique rapide avec des valeurs de CC50 comprise entre 21,49 et 80,42 µg/mL selon le type cellulaire. Au stade actuel, on peut estimer la DL50 comme supérieure à 500 mg/kg. ---- The common necessity to provide new treatments binds chronic inflammatory bowel diseases and the neglected tropical diseases. The dichloromethane extract of Carpolobia lutea G.Don (Polygalaceae) has demonstrated antiparasitic activity against Trypanosoma brucei brucei, one of the pathogens responsible for African trypanosomiasis. The methanolic extract of Salvadora oleoides Decne (Salvadoraceae) shows inflammation inhibition properties. These extracts have been previously identified as the most active among a series of tested plant extracts. The objective of this work is now to study their toxicity. 
 This project first analyses the cell viability on different cell lines by MTT assay by exposing them to the extracts in in vitro culture.
The second aspect of this master thesis aims to determine the toxicity of the extracts by in vivo method on female NMRI mice, by means of administrations carried out by gavage or by intraperitoneal injections. Three types of studies were conducted: a preliminary maximum tolerable dose test, an acute toxicity test that was carried out in stages to establish median lethal doses, and thirdly, a sub-acute toxicity experiment carried out with the S. oleoides extract during which fixed doses were administered daily for 14 days.

 S. oleoides extract did not show in vitro cytotoxicity at the maximum tested dose of 100 µg/mL. For in vivo toxicity, the LD50 is assessed to be over 2500 mg/kg. At the end of the subacute toxicity study, the extract administered at the oral dose of 1000 mg/kg/d did not cause any mortality or moribund state. On histological examination, fibrosis was found in the spleens of the treated mice.
C. lutea extract showed rapid non-specific cytotoxicity with CC50 values ranging from 21.49 to 80.42 µg/mL, depending on the tested cell type. At this stage, the LD50 can be considered to be more than 500 mg/kg.