Etude de l’effet des microRNA cellulaires sur la réplication du virus de Theiler et de l’inhibition de l’activité des microRNA par les protéines virales

Details

Supervisors

Michiels, Thomas

Faculty

Faculté de médecine et médecine dentaire

Degree label

Mémoire de master en sciences biomédicales (finalité spécialisée)

Abstract

Les microRNA (miRNA) cellulaires sont des petites molécules d’ARN dont la fonction est de réguler l’expression des gènes cellulaires. En s’hybridant par complémentarité de séquence à l’extrémité 3’UTR des ARN messager, ils peuvent induire, soit l’inhibition de la traduction de ces ARNm, soit leur dégradation. Chez les plantes et insectes, les miRNA peuvent également être impliqués dans l’immunité antivirale en s’hybridant à l’ARNm ou à l’ARN génomique d’un virus. Cependant, la plupart des virus cibles de ces miRNA cellulaires inhibent l’activité des miRNA en codant des protéines « suppresseur » des miRNA. Par exemple, le Tombusvirus TBSV, infectant les plantes de tomates, exprime une protéine appelée p19 qui lie les miRNA et les empêche de s’hybrider à leur séquence cible. De même, le Flock house virus (FHV) infectant les insectes encode une protéine appelée B2 qui séquestre les miRNA et leurs précurseurs. L’objectif de ce mémoire était d’une part, d’étudier l’effet des miRNA endogènes sur la réplication du virus de Theiler, et d’autre part, d’analyser dans quelle mesure le virus peut interférer avec l’activité des miRNA cellulaires. Nous avons construit un vecteur permettant de tester l’activité de protéines (virales ou cellulaires) antagonistes de la voie miRNA (activté « anti-silencer »). Pour cela, la séquence codant la luciférase de Renilla a été insérée dans un vecteur lentiviral avec, dans sa région 3‘ non-codante, la séquence cible du miRNA endogène let-7a. Cet outil semble fonctionnel bien qu’il doive encore être validé de manière définitive. A l’aide de ce vecteur, nous n’avons observé aucune activité anti-silencer de la protéine p19 du TBSV, alors que l’activité de cette protéine avait été montrée dans les cellules de mammifères. La protéine b2 du flock house virus n’a aussi montré qu’une relativement faible activité, partiellement indépendante de son effet sur le microRNA testé. Par ailleurs, nous avons évalué l’incidence de la présence de la séquence cible d’un microRNA dans la région codante du génome du virus de Theiler. Nous avons détecté un effet modéré du microRNA sur la réplication virale. En accord avec cette observation, une analyse théorique de la séquence du virus suggère une faible pression de sélection en vue de l’élimination des séquences cibles des miRNA dans l’ORF principale du génome viral. Ceci contraste avec les effets importants, observés par d’autres études, des microRNA sur les régions non-codantes d’autres picornavirus

Citations

• APA

De Cock, A. (2010). Etude de l’effet des microRNA cellulaires sur la réplication du virus de Theiler et de l’inhibition de l’activité des microRNA par les protéines virales. https://dial-mem.test.bib.ucl.ac.be/handle/2078.2/43848