Par quel mécanisme d'action un anticorps anti-GARP:TGF-β1 permet-il de diminuer la charge tumoral (le nombre de cellules transformées) dans le modèle MPLW508A de myélofibrose chez la souris?

Details

Supervisors

Lucas, Sophie ; Devreux, Julien

Faculty

Faculté de pharmacie et des sciences biomédicales

Degree label

Master [120] en sciences biomédicales, à finalité approfondie

Abstract

Le TGF-β1 est depuis longtemps incriminé dans la physiopathologie de la myélofibrose primaire (MFP), notamment dans le développement de la fibrose. L’activation du TGF-β1, produit sous forme latent (TGF-β1 latent) par la majorité des cellules, est possible via différents mécanismes cellulaires dépendants. A la surface des lymphocytes T régulateurs et des mégacaryocytes, la forme latente du TGF-β1 est présentée et activée par la protéine transmembranaire GARP. Ces complexes GARP:TGF-β1 peuvent être la cible d’ anticorps (Ac) qui bloquent l’activation du TGF-β1. Cette approche, plus spécifique que l’utilisation d’Ac neutralisant directement la forme active du TGF-β1, est prometteuse dans l’élaboration de traitements anti-tumoraux. En effet, des résultats préliminaires ont montré dans un modèle murin de myélofibrose, une réduction de la charge tumorale suite à l’utilisation de l’Ac anti-GARP:TGF-β1. L’objectif de ce mémoire est d’investiguer le rôle de l’activation de TGF-β1 au départ des complexes GARP:TGF-β1 dans la myélofibrose. Dans cette optique, nous avons généré des clones cellulaires exprimant le récepteur MPL sauvage (MPLWT), présentant la mutation activatrice W508A (MPLW508A), utilisée dans notre modèle murin pour induire le phénotype de la maladie ou présentant la mutation activatrice W515K (MPLW515K) retrouvée chez les patients atteints de myélofibrose. Dans la première partie de ce mémoire, nous avons étudié la sensibilité des clones cellulaires exprimant MPLWT, MPLW508A ou MPLW515K aux effets cytostatiques du TGF-β1, en réalisant des cultures cellulaires en présence de TGF-β1 et en mesurant l’incorporation de thymidine tritiée lors de tests de prolifération. Nos résultats montrent une augmentation de résistance aux effets cytostatiques du TGF-β1 lorsque les cellules expriment le récepteur muté , ce qui pourrait leur donner un avantage prolifératif vis-à-vis des cellules saines. Dans la deuxième partie du projet, nous nous sommes intéressés aux potentiels mécanismes moléculaires associés à cette diminution de sensibilité. Des expériences de Western Blot faites sur des extraits protéiques des lignées 32D exprimant MPLWT ou MPLW508A montrent que les premières étapes de la signalisation du TGF-β1 sont fonctionnelles (présence de la forme phophorylée de SMAD2 dans les deux lignées) et qu’il existerait une potentielle interaction entre la cascade de signalisation du TGF-β1 et celle du récepteur MPL (augmentation de la forme phosphorylée de STAT3 dans les deux lignées en présence de TPO et de TGF-β1). Afin de tenter d’expliquer la différence de résistance aux effets cytostatiques de TGF-β1, nous avons préparé des échantillons pour étudier le transcriptome de ces deux lignées par une expérience de RNA-Seq (expérience en cours).